微量熱泳動(MST)是一種簡單、快速、精確定量生物分子相互作用的方法。它可以測量分子在微觀溫度梯度場中的運動,以及檢測分子水化層、電荷和大小的改變,從而定量檢測生物分子間的相互作用。當進行MST實驗的時候,樣品由紅外激光加熱產生一個微觀的溫度梯度場,再通過共價結合的熒光染料來監測和定量分子的定向運動。應用范圍包括小分子的結合行為,蛋白與蛋白之間的相互作用以及蛋白復合體之間的相互作用等。.
微量熱泳動(MST)工作原理:將波長為 1480 nm 的紅外激光照射于熒光激發光路上,通過分色鏡照射到毛細管中的樣品,樣品中的水分子吸收紅外光發熱而形成溫度梯度。MST 儀器通過記錄激光器打開前、打開期間和打開后處于溫度梯度中的樣品內部紅外激光照射區域的熒光變化情況,從而實現較短時間的測定。
微量熱泳動(MST)實驗應用范圍
?。?/font>1)蛋白與蛋白相互作用
?。?/font>2)蛋白與小分子相互作用
?。?/font>3)多肽-多肽相互作用
?。?/font>4)蛋白與核酸相互作用
?。?/font>5)核酸適配子與小分子相互作用
微量熱泳動(MST)實驗特點:
1.實驗操作簡單,實驗過程快速,實驗和數據分析可以在20分鐘內完成;
2.樣品緩沖液要求不高,細胞裂解液也可進行檢測;
3.樣品無需固定在芯片或者傳感器上,僅需要進行熒光標記,就可以在天然環境下檢測;
4.適用范圍廣,分子量最小可以到離子級別,親和力的測定范圍從pM到mM級別;
5.樣品通量很高,每次可以運行16個濃度的樣品,樣品消耗量很小。
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